熱反射式激光共聚焦顯微鏡是近十多年研制成的高光敏度、高分辨率的新型儀器。它以激光為光源,由共聚焦成像掃描系統(tǒng)、電子光學系統(tǒng)和微機圖像分析系統(tǒng)組成。光束經(jīng)聚焦后落在樣品(組織厚片或細胞)不同深度的微小一點,并作移動掃描,通過電信號彩色顯像,可使樣品內(nèi)任何一點的反射光形成的圖像,都被準確地接收下來并產(chǎn)生信號,傳遞到彩色顯示器上,再連接微機圖像分析系統(tǒng)進行分析處理
共聚焦系統(tǒng)的光源為離子激光器或HeNe激光器,光源發(fā)出的激光束通過照明針孔后成為點光源P。點光源P通過分東器進入高數(shù)值孔徑顯微物鏡的成像系統(tǒng)成像后,在部分透明的被測樣品內(nèi)形成像點P。從像點P發(fā)出的散射光及反射光(波長為λ1)和其他熒光(波長λf>λ1),反方向經(jīng)過物鏡和分光鏡后,入射到單點探測器。單點探測器由探測器和放置在探測器前的針孔組成,它可以減少探測器的有效面積。探測器一般使用的是光電倍增管或雪崩光電二極管,探測器接收到的電信號最后由計算機進行處理。
?、偃绻す馐劢裹c的直徑小于針孔的直徑,則P處的針孔可以去掉。
?、谟行┎牧夏茏园l(fā)熒光,有些材料則需要用合適的染料上色。
共聚焦顯微鏡分類:
根據(jù)共聚焦點相對于標本的移動方式,目前共聚焦顯微鏡可分為3種。
其中z簡單的是在透鏡系統(tǒng)的光軸上固定住一個射限制點,控制其不發(fā)生術(shù)射,同時移動標本(標本掃描);
另一類是多點掃描型,弧形燈發(fā)出的光東經(jīng)一個轉(zhuǎn)動孔板精細定位,平行地進行掃描和檢測,也就是轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡;
最為常見的類型是單點掃描,即通過移動反射鏡或使用聲光偏轉(zhuǎn)儀使激光通過光柵進行偏轉(zhuǎn)。